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實驗小技巧丨教您幾招,治療SPE小柱“便秘”難題!

更新時間:2020-08-12      點擊次數(shù):1326

     今天是2019年的第yi個周一,從今天開始,安譜實驗微xin公眾號將在每周一(法定節(jié)假日除外)準(zhǔn)時發(fā)布一條干貨,力爭從用戶視角出發(fā),用更多更全面的專業(yè)內(nèi)容,為廣大實驗室科研人員搭建一個實用、專業(yè)的學(xué)習(xí)平臺,歡迎大家持續(xù)關(guān)注!

     好了,現(xiàn)在就開始今天的干貨放送吧!

 

小柱“便秘”怎么辦?

     在進(jìn)入主題之前,先簡單介紹下固相萃?。⊿PE)技術(shù)。

 

     固相萃取(Solid Phase Extraction,簡稱 SPE)技術(shù),發(fā)展于上世紀(jì) 70 年代,由于其具有高效、可靠、消耗試劑少等優(yōu)點,在許多領(lǐng)域取代了傳統(tǒng)的液-液萃取而成為樣品前處理的有效手段, 在實驗室中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標(biāo)物提純,有效地將目標(biāo)物與干擾物分離,大大增強對分析物,特別是痕量分析物的檢出能力,提高了被測樣品的回收率。

 

     萬千世界的奇妙,造就了樣品基質(zhì)的千差萬別,蔬菜,水果,肉蛋奶,水,土壤, 橡膠,紡織品等等,不管是食品還是環(huán)境的樣品,復(fù)雜程度也是各不相同。復(fù)雜程度一般的樣品可以用簡單提取作為前處理方法,但是對于特別復(fù)雜的樣品就需要經(jīng)過特殊的前處理,比如用SPE 小柱,做進(jìn)一步的凈化,把目標(biāo)物和雜質(zhì)分離,進(jìn)而在色譜儀器上得到一個漂亮色譜圖,大家看現(xiàn)行的一些標(biāo)準(zhǔn)就會發(fā)現(xiàn),有些樣品基質(zhì)的前處理肯定是會用到 SPE 手段的。

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     在用到 SPE 前處理的時候,各位分析檢測工程師碰到煩人令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況;過小柱過到令人崩潰,既然流速都保證不了,怎么敢奢求回收率。

 

     沒關(guān)系,安譜實驗憑借多年來在樣品前處理領(lǐng)域的深厚積累,教您幾招,治liao小柱“便秘”的難題。

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     SPE 的基本操作,包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫,五個步驟。問題無外乎出現(xiàn)在這幾個步驟里面,別急,我們一個個過來看。

 

活化平衡

     一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲醇和水進(jìn)行活化和平衡,正相小柱會用到石油醚或者正己烷來活化平衡。

 

1) 填料裝填過緊導(dǎo)致流速過慢。 可以通過加壓加快流速,或者購買對流速有嚴(yán)格質(zhì)控廠家的產(chǎn)品解決,安譜實驗對 CNW 小柱每個批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍,質(zhì)控范圍之外的小柱會被剔除。

 

2) 填料粒徑過小導(dǎo)致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下,100-200 目的 florisil 就會比60-100 目的更慢些。 可以根據(jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適規(guī)格的小柱。

 

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL; 500mg 6mL, 這兩種規(guī)格形成的填料高度不一樣,顯然 500mg 6mL,直徑大,填料高度低,流速相對就快,就像地鐵站早高峰,閘口多,通過速率快,閘口少,自然就擁堵,通過速率慢??筛鶕?jù)樣品基質(zhì)類型和使用習(xí)慣選擇合適柱管的小柱。

 

4) 溶劑順序加錯。對于反相類型小柱,如果不小心把水當(dāng)成活化溶劑,就會出現(xiàn)流速很慢的問題,因為水對于疏水性反相填料的浸潤性是很差的,所以不小心把水當(dāng)成甲醇來活化,可能等到花兒都謝了,它還是流不下來,注意別加錯哦。

 

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化,水平衡小柱,大家就會發(fā)現(xiàn),水加入后,流速也會慢到讓你崩潰。 這是因為水和二氯甲烷的互溶性差造成的,可以加入過渡溶劑甲醇來解決,甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

 

6) 空氣進(jìn)入填料。這個原因比較常見但也是比較難發(fā)現(xiàn)的原因, SPE 小柱是由篩板,填料,柱管組成,不是有機的整體,所以在運輸尤其是長途運輸?shù)倪^程中,就會出現(xiàn)微小的松動,導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料,一般不容易被肉眼所發(fā)現(xiàn)。含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致活化溶劑流下速度很慢。說到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱,會出現(xiàn)輕微的流速參差不齊的情況,可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后,再一起加溶劑。

 

上樣

     由于樣品基質(zhì)的復(fù)雜性,篩板孔徑在 20um,在上樣之前需要把顆粒物給過濾掉,比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉;對于一般的基質(zhì),應(yīng)采用過濾,離心或者高速離心,換大孔徑填料等方式進(jìn)行處理,現(xiàn)在好多第三方檢測單位樣品量非常多,但是該做的前處理步驟不能省,否則對儀器的損壞,對數(shù)據(jù)的可靠性都會有一定的影響。

 

淋洗和洗脫

      一般在淋洗和洗脫這兩步出現(xiàn)流速慢的情形比較少,因為淋洗和洗脫都是不帶基質(zhì)的純?nèi)軇?,一般上樣步驟沒有堵塞,就不會影響到淋洗和洗脫??赡艹霈F(xiàn)流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后,因為一旦干燥小柱,就會使空氣進(jìn)入填料,這就回到了活化平衡導(dǎo)致流速慢的第 6 個原因,只要稍微加壓就可以解決問題了。

 

     當(dāng)然我們在做實驗的時候,不是每個步驟都要求快,魯迅說過:欲速則不達(dá),所以在小柱操作技巧里面,有兩個步驟是需要控制流速的, 分別是上樣和洗脫;這兩個過程是目標(biāo)物與柱填料通過分子間作用力進(jìn)行吸附和解吸附的過程,需要時間慢慢作用,大家一定要注意呦!

 

 

這一次干貨時間就為大家分享到這里,

下次再見!